具体设计规则:
长度
合成PNA序列的长度通常不超过18个碱基,不包括接头、氨基酸和标记物。 PNA序列中可以添加一个赖氨酸或半胱氨酸作为氨基酸修饰,这可以位于序列的N端或C端。
嘌呤含量
嘌呤含量的控制对于PNA的聚合反应及水溶性至关重要。为避免聚合,应将嘌呤含量限制在60%以下。例如,序列GATTAGCAGTCTACG是可行的,因为其嘌呤含量低于60%。在序列中,连续出现的嘌呤不得超过4个,而鸟嘌呤不得超过3个。例如,序列ATTAGGGGCATCTAC因含有4个连续的G而不可行;而CTAGATAGAAGGTTC则因含有6个连续的嘌呤而不可行。如果无法避免上面的限制,可以考虑探针的互补链,例如GTAGATGCCCCTAAT是可行的,因为其为上面序列的互补序列,没有违反任何准则。
自我互补序列
为避免自我互补序列的形成,尤其是反向重复、发夹和回文序列,建议保持基本设计原则。由于PNA/PNA相互作用比PNA/DNA更强,此类探针容易导致聚合。在互补的四个碱基中,C和G的组合只在间隔一个或多个碱基时才可行。例如,序列GATAATTGCA是可行的,而GATCCGGTAC因只有CCGG互补而不可行;TATCCTGGTA则因CC、GG之间间隔一个碱基而可行。而六个及以上碱基的互补是不可行的,如CTATTAATGCA就是一个例子,而AGTGCTACT则是可行的。
一般规则
我们强烈建议设计反向平行的PNA探针。虽然PNA可以在任一方向形成双链,反向平行取向优先,形成最常见的双链结构。特别是在反义和DNA探针应用中,反向平行是最优先的构象。当PNA探针处于反向平行取向时,其N端对应于DNA的5’端。需要注意的是,PNA的熔点Tm不同于DNA。由于PNA链是不带电的,PNA-DNA的Tm值通常会高于相应的DNA-DNA对。在100mM NaCl浓度下,每增加一个碱基,Tm值大约提高1°C。在较低盐浓度中,Tm值的差异会更加显著。通常,一个含10个碱基的PNA,其Tm值约为50°C,含15个碱基的PNA其Tm值则约为70°C。12至17个碱基的PNA序列最为理想。序列长度依赖于特定的应用需求,PNA探针在DNA应用中所需的长度通常更短。长链PNA易于聚合,导致纯化和表征困难;而短序列则显示出更强的特异性,因此在设计时需考虑不匹配对结果的影响。
订单与交货信息
尊龙凯时的PNA订购价格根据序列长度、产量、纯度及修饰标记而异。如有具体需求,请及时与我们联系。最低订购量为:未标记PNA 20 nmole,标记PNA 10 nmole。我们提供90%和95%的纯度选择,且可提供HPLC纯度分析和质谱分析报告。一般情况下,订单交货周期为2-3周,特殊要求如gammaPNA或修饰标记则为3-4周。
相关引用
如想了解使用尊龙凯时PNA的相关研究文献,以下是一些精选引用:
- Exponential Increase in an Ionic Signal: A Dominant Role of the Space Charge Effect on the Outer Surface of Nanochannels Anal Chem | 28 Sep 2021 All single-stranded PNA sequences were purchased from SBS Genetech Co, Ltd (Beijing, China)
- Peptide Nucleic Acid-Functionalized Nanochannel Biosensor for the Highly Sensitive Detection of Tumor Exosomal MicroRNA Anal Chem | 30 July 2021 PNA was synthesized by SBS Genetech Co Ltd (Beijing, China)
- Ultrasensitive Exosomal MicroRNA Detection with a Supercharged DNA Framework Nanolabel Anal Chem | 2 April 2021 Thiolated PNA with a −(CH2)6− spacer at the 5′ end was synthesized and purified by SBS Genetech Co, Ltd (Beijing, China)